L’edificio che ospita il Museo è ubicato nel centro storico di Romano di Lombardia, all'interno delle mura medioevali. L’esposizione di collezioni e reperti  segue un criterio cronologico che prende le mosse dalle origini di Romano di Lombardia, prosegue con opere rinascimentali, barocche e ottocentesche, fino a giungere a esemplari di arte sacra contemporanea, con terrecotte, sculture, dipinti, oreficerie, arredi e le opere dell’artista Rinaldo Pigola. Il Museo ospita inoltre una quadreria, una collezione di icone russe e statue di santi sotto campana di vetro e una Biblioteca ricca di oltre 30.000 volumi.

Il museo dispone di altre strutture distribuite nel contesto cittadino, quali le chiese di Santa Maria Assunta e San Giacomo Maggiore, la Basilica di San Defendente, e gli Oratori delle Confraternite visitabili in occasione di mostre temporanee.

ll Museo d'Arte e Cultura Sacra è stato riconosciuto come Museo nel 2007.